VÝZKUM 2004

26.12.2004

· PTC Therapeutics Initiates a Phase 1 Multiple-Dose Study Of PTC124, An Investigational Drug for Cystic Fibrosis and Duchenne Muscular Dystrophy

PTC Therapeutics, Inc. (PTC), biofarmaceutická firma zaměřená na výzkum, vývoj a komercializaci léků oznámila zahájení I fáze studie PTC124 na zdravých dobrovolnících. PTC124 je nový orálně podávaný lék zaměřený na nonsense mutace. S tímto lékem se bude nejdříve zkoušet léčit cystická fibróza a Duchenneova svalová dystrofie, ale do budoucna by mohl být použit pro řadu dalších genetických chorob. Předpokládá se, že PTC124 by u DMD měl pomoci asi 5%÷15% pacientů.

· Phase I study of dystrophin plasmid-based gene therapy in duchenne/becker muscular dystrophy

· Systemic delivery of antisense oligoribonucleotide restores dystrophin expression in body-wide skeletal muscles

· Should Foot Surgery Be Performed for Children With Duchenne Muscular Dystrophy?

· Coagulation system activated in Duchenne muscular dystrophy patients with cardiac dysfunction

· Muscular Dystrophy Gene Therapy Trial Passes First Test by NIH Committee

· Duchenne Muscular Dystrophy: Stalled at the junction?

16.12.2004

· 2004 Annual Conference PPMD - Powerpoint Presentations

· Comparison of high-capacity and first-generation adenoviral vector gene delivery to murine muscle in utero (pdf)

· Duchenne Muscular Dystrophy: Stalled at the junction? (pdf)

12.12.2004

Enzymový klíč k úspěchu steroidů v léčbě DMD

Bernard Jasmin

Kortikosteroidní léky jako Predisone nebo Deflazacort jsou často předepisovány pro zpomalení úbytku svalové výkonnosti u Duchenneovy svalové dystrifie (DMD) a jiných nervosvalových chorob. Oba pravděpodobně vedou ke zvýšené produkci bílkoviny utrophin, která je podobná dystrofinu, což je bílkovina chybící u DMD. Zvýšená produkce utrofinu může částečně kompenzovat chybějící dystrofin.

Nyní Lynn Megeney (Ottawa Health Research Institute v Ontáriu), Bernard Jasmin (Department of Cellular and Molecular Medicine, university of Ottawa) a kolegové zjistili přesnou biochemickou signálovou cestu, která vede ke zvýšení utrofinu.

Lynn Megeney

Nový objev publikovaný 29. září 2004 v FASEB (Federation of American Societies for Experimental Biology) ukazuje, že dystrofin deficitní buňky potřebují enzym calcineurin pro regeneraci. Výzkum ukázal, že zvýšení calcineurinu umožňuje dystrofin deficitním buňkám obejít biochemickou signálovou cestou zvanou JNK1, která obvykle vede k jejich smrti, a že zvýšení produkce utrofinu je jednou z hlavních výhod této signálové cesty.

“Naše pozorování nyní vyjasňují mechanismus, kterým steroidy dosahují účinku“, říká Megeney. „Tato studie také potvrzuje, že patologie dystrofin-deficitních svalů pochází částečně ze zvýšeného JNK1 a že farmakologická korekce této signálové cesty upregulací calcineurinu je správný přístup k léčbě DMD.“

Menegey dále uvádí, že vedlejší účinky kortikosteroidů jako jsou zvýšení váhy, oční zákal, řídnutí kostí nebo psychické problémy jsou závažnou překážkou pro jejich užívání. S novými informacemi jakým mechanismem kortikosteroidy opravdu pomáhají dětem s DMD je možné vyvinout lepší, přesněji cílené léky s redukovanými vedlejšími účinky.

11.12.2004

· A novel approach to identify Duchenne muscular dystrophy patients for aminoglycoside antibiotics therapy

· Strand bias in oligonucleotide-mediated dystrophin gene editing

· Study on the recombinant adeno-associated virus vector carrying LacZ gene expression in the skeletal muscle

· Progress in the treatment of Duchenne Muscular Dystrophy

7.12.2004

Nalezeny kmenové buňky schopné přeměny ve svalové

Yvan Torrente z Milánské University v Italy a kolegové v Itálii a Franci objevili způsob jak identifikovat kmenové buňky cirkulující v krevním oběhu se schopností přeměnit se ve svalové buňky. Giulio Cossu z Stem Cell Research Institute v San Raffaele Hospital v Milan, který provádí výzkum v oblasti velmi blízké a je podporován MDA, byl členem tohoto týmu.

Objev ukázal, že buňky cirkulující v lidském krevním oběhu, které mají na povrchu protein nazývaný AC133, se mohou přeměnit ve svalové buňky pokud jsou v laboratoři vystaveny jisté látce nebo pokud jsou injikovány přímo do tepen myší. Když vědci injikovali lidské kmenové buňky s AC133 do myší s chorobou připomínající DMD přinejmenším některé se přeměnily ve svalové. (Myši měly imunitní deficit umožňující jim přijmout lidské buňky.) Některé AC133 buňky se přeměnily v satelitní buňky, které se nachází okolo svalových vláken a jsou schopny je opravit v případě potřeby. Ostatní buňky se přeměnily přímo ve svalové.

“Protože tyto buňky mohou být izolovány z krve, zpracovány in vitro a prostřednictvím krevního oběhu v těle opět rozšířeny, představují možný nástroj vhodný pro budoucí buňečnou terapii nejen DMD ale i některých jiných svalový dystrofií” tvrdí badatelé ve své práci publikované v červencovém čísle Journal of Clinical Investigation.

5.12.2004

· TAMOXIFEN increases muscular strength of the mdx dystrophic mice

· HSCs for muscular dystrophy: a paradigm shift, back

· Report of a Muscular Dystrophy Campaign funded workshop Birmingham, UK, January 16th 2004. Osteoporosis in Duchenne muscular dystrophy; its prevalence, treatment and prevention

· Early onset of lipofuscin accumulation in dystrophin-deficient skeletal muscles of DMD patients and mdx mice

· Duchenne muscular dystrophy with associated growth hormone deficiency

· Erythrocyte from Duchenne muscular dystrophy is fragile

28.11.2004

· Deleteriuos effects of immobilization upon rat skeletal muscle: role of creatine supplementation

· CAPON expression in skeletal muscle is regulated by position, repair, NOS activity, and dystrophy

· Mivacurium in Children with Duchenne’s Muscular Dystrophy: A Comparison of Onset and Duration of Neuromuscular Block with Children without Neuromuscular Diseases

· The prognostic value of pre-operative predicted forced vital capacity in corrective spinal surgery for Duchenne's muscular dystrophy

17.11.2004

· Systemic delivery of genes to striated muscles using adeno-associated viral vectors

· Gene delivery goes global

· Abstracts presented on 14th Meeting of the European Neurological Society – Spain, June, 2004

o Effect of treatment with PDTC and IRFI 042 on strength and fatigue in MDX mice

o Bone marrow transplantation poorly restores dystrophin expression in MDX mice: comparison of GFP and dystrophin expression

o Language disorders in Duchenne's muscular dystrophy

14.11.2004

· Development of an Innovative Technique of Gene Therapy: Exon Skipping

Francouzská laboratoř Genethon (http://www.genethon.fr) založená a financovaná Association Francaise contre les Myopathies (AFM, http://www.afm-france.org/) oznámila, že uspěla při léčbě svalů u mdx myší (myší model DMD). Tým vedený Olivierem Danosem a Luisem Garciou ve spolupráci s pařížským Cochin Institute toho dosáhl pomocí metody zvané “exon skipping”. Pro přenos potřebné molekuly do svaly byl použit AAV (Adeno Associated Virus) vektor. Tuto metodu bude možno použít i pro léčbu některých jiných svalových dystrofií, cystické fibrózy nebo třeba hemofilie. AFM teď rozjíždí rozsáhlý program na vyhledání dalších chorob léčitelných touto metodou.

Laboratoře AFM připravují klinické pokusy pro DMD, sarcoglycanopathy, calpainopathy a Wiskot-Aldrichův syndrom. Do roku 2007 by měla být připravena první fáze klinických pokusů, u DMD se zaměřením na exon 51. Podle Advances in Duchenne muscular dystrophy „vystřižení“ exonu 51 by mělo vést k léčbě 17,5% delecí, což je největší procento delecí léčitelné odstraněním jediného exonu. A zvládnutí odstranění jen 6 exonů by mělo vést k léčbě 85% delecí u lidí (databáze: JC Kaplan, Cochin Institute).

· Researchers make muscular dystrophy breakthrough

Bombasticky napsaný článek nicméně s racionálním jádrem. „Genetic band-aid“ je jen jiný název pro „molecular patches“ či „exon skipping“, čili jde o stejnou metodu jakou se v Evropě zabývá tým Judith Van Deutekom. Brett Tizard slibuje, že další informace by se měly brzy objevit na stránkách : http://www.anri.uwa.edu.au/. Bližší informace Tizard slibuje prezentovat na konferenci “Muscular Dystrophy 2005”, která proběhne 15. a 16. července 2005 v Perth v Austrálii. Více o této konferenci : http://www.md2005.info/.

12.11.2004

· Current concepts in neuromuscular scoliosis

· Evolving Therapeutic Strategies for Duchenne Muscular Dystrophy: Targeting Downstream Events

· Rescue of Dystrophic Muscle Through U7 snRNA-Mediated Exon Skipping

· Effects of stretch-activated channel blockers on [Ca2+]i and muscle damage in the mdx mouse

· Tissue Doppler imaging detects early asymptomatic myocardial abnormalities in a dog model of Duchenne's cardiomyopathy

· Duchenne Muscular Dystrophy research focuses on early mechanisms

· Key clues to muscle regeneration

· Stem cell transplantation in DMD - first report in China

V Číně proběhl pokus s léčbou DMD pomocí kmenových. Asi před 3 měsíci byly nitrožilně podány dvanáctiletému chlapci s DMD kmenové buňky získané z pupeční šňůry nepříbuzného dárce. 76 dní po podání byla udělána svalová biopsie, v některých svalech byl dystrofin slabě pozitivní a je jisté že pochází z kmenových buněk. Chlapec vykazuje lehké zlepšení pohybových funkcí. Další chlapec je připravován na transplantaci.

· Abstracts presented on Annual Meeting of The American Society of Human Genetics

o Body-wide delivery of a microdystrophin gene via intravascular administration of rAAV6 vectors for treatment of muscular dystrophy

o Therapeutic antisense-induced exon skipping for Duchenne muscular dystrophy

· Optimization of Regional Intraarterial Naked DNA-Mediated Transgene Delivery to Skeletal Muscles in a Large Animal Model

· Duchenne muscular dystrophy and dystrophin: pathogenesis and opportunities for treatment

· Targeted expression of insulin-like growth factor-i reduces early myofiber necrosis in dystrophic mdx mice

· Comparison of high-capacity and first-generation adenoviral vector gene delivery to murine muscle in utero

· Helpful Informations about  Steroids in DMD

· Muscle ultrasound in children: Normal values and application to neuromuscular disorders

11.11.2004

Tamoxifen

Ivana Švandová

Tamoxifen je cytostatikum, umělý nesteroidní antiestrogen, který může s estrogeny cirkulujícími v krevní plasmě kompetovat při vazbě na cytoplazmatický estrogenní receptor. Se slušnou afinitou se na daný receptor naváže, pro „přirozený“ estrogen už tam pak není místo – ale daný komplex Tamoxifen/receptor není funkční. Po přenesení do buněčného jádra potom nedojde k rozmnožení proliferující nádorové buňky, protože tento komplex zablokuje spuštění přepisu některých genů tím, že se naváže například na jejich promotorové sekvence (viz jak vzniká protein). Základem účinku Tamoxifenu je tedy jeho vazba na estrogenový receptor, který už ale s tímhle ligandem nemůže splnit svoji funkci, a místo aby např. stimuloval po vstupu do jádra dělení buněk, tak mu naopak zabrání.

V případě toho typu rakoviny je sice tamoxifen popisován jako antiestrogen, ale může se chovat taky jako agonista estrogenů (napodobovat jejich účinek), nebo i obojace - částečně jako agonista nebo antagonista, což závisí od studovaného živočišného druhu, cílového orgánu nebo genetického potenciálu (na co se má účinkem zaměřit). Trochu kaše. :)

A jak to souvisí s TNF-b?

Tumor-nekrotizující faktory (TNF) jsou důležité cytokiny – molekuly zapojené zejména do zánětlivých procesů. V tkáních (a svalová není vyjímkou) se účastní reakcí spojených s chronickými stavy i s akutním poškozením. Do poškození tkáně vcestují leukocyty a začnou produkovat množství cytokinů, což posílí zánětlivou reakci, bez níž by následná obnova tkáně nebyla možná (nejdřív je nutno zlikvidovat to poškozené). Hlavním mediátorem zánětlivých reakcí bývá TNF-a, nazývaný taky kachektin. Aktivuje chemotaxi leukocytů do místa zánětu, zvyšuje produkci adhezívních molekul na povrchu dalších pomocných buněk, aby se mohly lépe „přilepit“ do místa zánětu a pomáhat leukocytům, zvyšuje sekreci dalších prozánětlivých cytokinů (interleukinu-1, interferonu gama), které pak posílí zánětlivou reakci. Tenhle TNF má bratříčka TNF-b nazvaného lymfotoxin. Jeho účinek není tak extrémní jako u TNF-a, ale váže se vlastně na tytéž receptory. V případě chronické nebo nadměrné produkce TNF už není ovšem činek zánětlivé reakce benefitem, ale škodí, začne být napadána i tkáň, která si to zatím „nezasloužila“.

O estrogenech se ví, že potlačují produkci u TNF-a, a to tím, že potlačují jeho transkripci právě složitou soustavou reakcí končící navázáním komplexů s estrogeny na promotor u TNF-a genu. Snižují tak možnost poškození tkáně přehnanou zánětlivou reakcí. O tamoxifenu a některých dalších umělých anti/estrogenech se taky ví, že potlačuje „dospívání“ určitého typu makrofágů (buněk zodpovědných za nespecifické imunitní reakce) a brání jejich vyzrání na tzv. dendritické buňky, které produkují protilátky. Je proto podáván jako podpůrná látka při některých autoimunitních chorobách (hlavně kloubních nebo kožních - revmatické arthritidě, lupence apod.). Obecně tedy tyto látky snižují sílu zánětlivých procesů.

Jak přesně a konkrétně interaguje tamoxifen se systémem tumor-nekrotizujících faktorů nevím, ale pravděpodobně cestou snížení jejich produkce zablokováním promotoru jejich genů. Zřejmě tedy výrazně snižuje úroveň zánětlivých procesů ve svalu. Když pak zajde na zánět míň myocytů, které by mu padly jen tak „bokem“ za oběť, bude i celý sval vykazovat lepší silové vlastnosti.

13.10.2004

· Tamoxifen increases muscular strength of the mdx dystrophic mice

Tamoxifen působí na TGF beta, což je skupina proteinů účastnící se degenerace a regenerace svalů. V této studii byl tamoxifen podáván mdx myším a to v množství 5mg/Kg a 10 mg/Kg. Po pěti týdnech podávání byl zjištěn významný nárůst svalové výkonnosti a trval po celou dobu podávání léku. Nyní se připravují pokusy na psech.

Tamoxifen je lék běžně používaný na léčbu rakoviny prsou a bývá ženám podáván dlouhodobě bez vážnějších vedlejších účinků. U mladších pacientů bývá podáván jen vzácně, žádné vedlejší účinky nebyly pozorovány. Někdy bývá používán i na zánětlivé choroby.

Experiment uskutečnil tým Dr. Davida Federa z brazilského Genetic Therapy Center (CTG) v Ribeirao Preto. Toto centrum patří brazilské Association of Friends of DMD (AADM) a bylo vybudováno a vybaveno z darů rodičů a nadace State of São Paulo Research Foundation (Fapesp). Podle informací od Dr. Davida Federa má jeho tým vytypováno asi 5 dalších léků používaných na jiné choroby u kterých předpokládají pozitivní vliv na DMD a chystají se je v nejbližší době začít testovat. Rychlost výzkumu je však silně limitována omezenými finančními možnostmi. Dr. David Feder je otcem devatenáctiletého syna Leonarda trpícího DMD.

· Human Retinal Dystrophin Transgene Converts Lethal Muscular Dystrophy into Viable Mild Myopathy in Dystrophin-Utrophin Null Mice

· Visualization of Ectopic Calcification in mdx Mouse Skeletal Muscle

· Muscle Proteoglycan Levels in Duchenne Muscular Dystrophy Differ from Other Muscular Dystrophies

· Sex Differences in Muscle Stem Cell Transplantation Efficiency

7.10.2004

· Subproteomics analysis of Ca²⁺-binding proteins demonstrates decreased calsequestrin expression in dystrophic mouse skeletal muscle

· Santhera Pharmaceuticals and Genzyme Enter Into Option and License Agreement for Discovery of Therapies for Muscle Diseases

· Dystrophy cure efforts rewarded

· Third Round Table Conference in Monaco on 19 June 2004

3.10.2004

· Parent Project UK, Muscular Dystrophy Campaign, 2004 Annual Conference

Ve dnech 25 a 26 září proběhla konference PPUK. Na této konferenci bylo oznámeno zahájení klinických pokusů s AO (Antisense Oligonucleotide) v Británii a Holandsku ještě do konce roku 2004. V první fázi půjde o testování bezpečnosti AO a bude trvat přibližně 2 roky. V druhé fázi, která by mohla začít v roce 2006, se bude zjišťovat účinnost AO. Bliží informace přineseme v nejbližších dnech.

· Recombinant adeno-associated viral (rAAV) vectors as therapeutic tools for Duchenne muscular dystrophy (DMD)

· Glucocorticoid treatment alleviates dystrophic myofiber pathology by activation of the calcineurin/NF-AT pathway

· Gender dimorphism influences extracellular matrix expression and regeneration of muscular tissue in mdx dystrophic mice

· Bone Marrow Cells Regenerate Heart in Brazil Test

· IGF1 Helps Leg Muscles in DMD-Affected Mice

24.9.2004

· Regenerative capacity of the dystrophic (mdx) diaphragm after induced injury

· C-Terminal Truncated Dystrophin Identified in Skeletal Muscle of an Asymptomatic Boy with a Novel Nonsense Mutation of the Dystrophin Gene

· Antisense Therapeutics: A Promise Waiting to Be Fulfilled

· Localization and early time course of TGF-beta 1 mRNA expression in dystrophic muscle

· 'Mighty mouse' helping find ways to prevent osteoporosis

16.9.2004

· Heregulin ameliorates the dystrophic phenotype in mdx mice, ( pdf )

· Function induced modifications of gene expression: an alternative approach to gene therapy of Duchenne muscular dystrophy

· 'Mighty mouse' helping find ways to prevent osteoporosis

· Characteristics of the increase in plasma brain natriuretic peptide level in left ventricular systolic dysfunction, associated with muscular dystrophy in comparison with idiopathic dilated cardiomyopathy

15.9.2004

· CTLA4Ig delivered by high-capacity adenoviral vector induces stable expression of dystrophin in mdx mouse muscle

14.9.2004

· PTC Therapeutics Awarded Grant from the Parent Project Muscular Dystrophy for Drug Discovery Research

PTC Therapeutics Inc. biofarmaceutická společnost zaměřená na hledání, vývoj a komercializaci léků na principu regulace produkce bílkovin malými molekulami oznámila dnes, že obdržela grant 1.000.000$ od PPMD ( Parent Project Muscular Dystrophy ), aby objevila nové látky pro léčbu DMD. PPMD a PTC společně vytypovali geny, jejichž ovlivnění by mohlo mít terapeutický význam pro DMD. PTC použije svou technologii GEMS ( Gene Expression Modulation by Small-molecules ) pro identifikaci malých molekul vhodných pro vývoj nových léků pro léčbu DMD.

· GEMS: A New Way of Looking

12.9.2004

· Graffinity Pharmaceuticals AG and MyoContract AG Merge to Form Santhera Pharmaceuticals Ag, ( pdf )

Výrobce léků, firma GRAFFINITY a MYOCONTRACT AG se sloučily ve společnost SANTHERA PHARMACEUTICALS AG

Soukromá společnost GRAFFINITY Pharmaceuticlas AG a MyoContract dnes oznámily své sloučení ve společnost SANTHERA PHARMACEUTICALS AG. Tato nová společnost se zaměří na výzkum, vývoj a komercializaci léku pro nervosvalová a metabolická onemocnění.

Sloučením biofarmaceutické společnosti zaměřené na nervosvalová a metabolická onemocnění HEIDELBERG, Německo, společnosti BASEL a LIESTAL, která soukromě vyvíjela léky AG a MyoContractAG Švýcarsko vznikla nová forma spolupráce SantheralPhramaceuticals AG. Finanční detaily nebyly zveřejněny. Sídlo této nové společnosti bude ve Švýcarsku ( Liestal) výzkum a vývoj bude probíhat také v Heidelbergu.

Postup Santery při vývoji léků zahrnuje i moderní klinický program pro nervosvalové nemoci, který začne počátkem roku 2005 a dále tři předklinické programy pro cukrovku, kachexii/anorexii a Duchennovu svalovou dystrofii. Díky technologii, kterou vlastní Santhera bude možné uspíšit programy spojené s vývojem nového léku. Díky vlastnictví této technologie je Santhera vůdčí biotechnologickou společností v Evropě.

V důsledku zformování této jedinečné nové společnosti směřují objevy předchozích společností ke komercializaci. Kombinace know-how Graffinity a MyoContractu vytváří impozantní farmaceutickou společnost s příslibem produkce nových léků pro nervosvalové nemoci s potenciálem v oblasti metabolických poruch.

Sloučení vytvořilo jedinečnou příležitost vytvořit silnější společnost s mnohem většími finančními zdroji, což umožní také s produkty obchodovat.

Santhera Phramceuticals dnes stojí na prahu nové éry. Vyvíjený lék se skládá z jednoho produktu ve fázi II/III klinického ověřování pro použití u nervosvalových nemocí, jakož i pokročilý předklinický vývoj zahrnující calpain inhibitory pro Duchenne svalovou dystrofii, inhibitory pro cukrovku.

· Mirus Bio Enters into Research Agreement with Genzyme

· Round table conference in Monaco on 19 June 2004: Transfer of the dystrophin gene

29.8.2004

· Functional and Structural Improvements in mdx Skeletal Muscle Following Chronic Daily Administration of Pyrrolidine Dithiocarbomate (PDTC)

· Effects of exercise and steroid on skeletal muscle apoptosis in the mdx mouse

· Administration of Insulin-Like Growth Factor-I Improves Fatique Resistance of Skeletal Muscles from Dystrophic mdx Mice

· Immune Parameters in Three Duchenne Muscular Dystrophy Patients Following Intramuscular Transplantation of Normal Myogenic Cells Under FK506 Immunosuppression

· Hematopoietic stem cell transplantation does not restore dystrophin expression in Duchenne Muscular Dystrophy dogs

24.8.2004

· Experts Develop Guidelines on Respiratory Care in DMD

· Sustained Muscle Expression of Dystrophin from a High-Capacity Adenoviral Vector with Systemic Gene Transfer of T Cell Costimulatory Blockade

· The alteration of calcium homeostasis in adult dystrophic mdx muscle fibers is worsened by a chronic exercise in vivo

· Marathoning Mice Could Have Olympian Effects on Obesity

· Research group unveils genetically-engineered mice

21.8.2004

· Chimeric RNA/Ethylene-Bridged Nucleic Acids Promote Dystrophin Expression in Myocytes of Duchenne Muscular Dystrophy by Inducing Skipping of the Nonsense Mutation-Encoding Exon (pdf)

· Intraarterial Delivery of Naked Plasmid DNA Expressing Full-Length Mouse Dystrophin in the mdx Mouse Model of Duchenne Muscular Dystrophy (pdf)

· AAV Vector-Mediated Microdystrophin Expression in a Relatively Small Percentage of mdx Myofibers Improved the mdx Phenotype

· Blood loss in pediatric spine surgery

· More information about blood loss in DMD spine surgery

· Newly discovered protein may be key to muscular dystrophy

· Respiratory Care of the Patient with Duchenne Muscular Dystrophy - ATS Consensus Statement

· 2004 PPMD Annual Conference Powerpoint Presentations

· SNF-6 is an acetylcholine transporter interacting with the dystrophin complex in Caenorhabditis elegans

· Nucleofection of Muscle-Derived Stem Cells and Myoblasts with C31 Integrase: Stable Expression of a Full-Length-Dystrophin Fusion Gene by Human Myoblasts

· A Facile Nonviral Method for Delivering Genes and siRNAs to Skeletal Muscle of Mammalian Limbs

· Targeted Exon Skipping in Transgenic hDMD Mice: A Model for Direct Preclinical Screening of Human-Specific Antisense Oligonucleotides

1.8.2004

· Prednisolone therapy in Duchenne muscular dystrophy prolongs ambulation and prevents scoliosis

· Deflazacort in Duchenne muscular dystrophy: a comparison of two different protocols

· Katie Bushby, UK, presentations :

o General Principles of Management in DMD

o Steroids — Speaking the Same Language

· Respiratory Care of the Patient With Neuromuscular Weakness: The (not so) New Paradigm

· Prednisolone decreases cellular adhesion molecules required for inflammatory cell infiltration in dystrophin-deficient skeletal muscle

31.7.2004

Vědcům podporovaným MDA se podařilo doručit rozsáhlý gen do svalu

Vědci z Univerzity ve Washington - Seattle doručili gen pro výrobu dystrofinu do svalů DMD myší pomocí nitrožilní injekce.. Přenos tak rozsáhlého genu dosud nebyl možný.

Šéf výzkumu Jeffrey Chamberlain (grant MDA na Katedře neurologie, biochemie a medicíny) použil několik inovačních technik k doručení genu pro dystrofin, který u DMD chybí a u BMD je nedostatečný. Valerie Cwik, vedoucí lékařského výzkumu uvedla: “Hlavní cílem genové terapie pro svalová onemocnění je zvýšení síly a funkce ve svalech. Současné výsledky tohoto výzkumu dosažené na myších představují opět další krok k účinné léčbě lidí". "Limitem v genové terapii do dnes byla skutečnost, že nikdo dosud nenašel metodu, která by byla účinná pro všechny svaly dospělého živočicha, včetně těch poškozených. Náš nový přístup je první, který umožňuje doručení dystrofinového genu ke všem zasaženým svalům díky bezpečné a jednoduché metodě."

Výzkum se liší od ostatních přístupů v několika směrech :

1. Vědci "zabalili" gen do nového typu virového vektoru AAV6. Z viru jsou odstraněny všechny jeho vlastní geny a tak je nemožné, aby se duplikoval v těle, zároveň se zdá být velice účinný a bezpečný pro doručení genů do svalových buněk.

2. Vědci zvýšili schopnost nosiče s dystrofinovým genem tím, že myši podali cévní endoteliální růstový faktor (VEGF). VEGF zvyšuje propustnost cév tak, že nosič může pronikat do okolních svalů po té, co je vstříknut do krevního řečiště. Použití této směsi by mohlo být bezpečně použito i u lidí.

3. Vědcům se podařilo vyřešit problém nechtěné imunitní odezvy organismu. Vědci zkoušeli dva různé molekulární " navaděče", které předají buňkám informace, aby začaly vyrábět bílkovinu dystrofin.

Aktivita dystrofinového genu - výroba dystrofinu byla patrná více než 8 týdnů. Hodnota kreatin kinázy ( enzymu, který ukazuje na poškození svalových tkání) byla poloviční.

Nyní máme zásadní důkaz, že je možné do svalů doručit nové, rozsáhlé geny. Bezprostřední cíl je zjistit, zda to bude fungovat u lidí. Nyní plánujeme použití nového virového vektoru na pacientech.

27.7.2004

· Gene Therapy Reverses Muscular Dystrophy in Animal Model

· Systemic delivery of genes to striated muscles using adeno-associated viral vectors

· Innate inflammatory cells are not responsible for early death of donor myoblasts after myoblast transfer therapy

· Annexin expression in inflammatory myopathies

· Growth factors improve the in vivo migration of human skeletal myoblasts by modulating their endogenous proteolytic activity

· Ezrin-dependent regulation of the actin cytoskeleton by {beta}-dystroglycan

· Altered activity of signaling pathways in diaphragm and tibialis anterior muscle of dystrophic mice

· Duchenne or Becker muscular dystrophy in girls

· Prednisone reduces muscle degeneration in dystrophin-deficient Caenorhabditis elegans

· Altered blood-brain barrier development in dystrophic MDX mice

· An intragenic deletion/inversion event in the DMD gene determines a novel exon creation and results in a BMD phenotype

24.7.2004

· Anesthetic Implications of Neuromuscular Disease

· Factors Influencing the Efficacy, Longevity, and Safety of Electroporation-Assisted Plasmid-Based Gene Transfer into Mouse Muscles

· CTLA4Ig delivered by high-capacity adenoviral vector induces stable expression of dystrophin in mdx mouse muscle

· Novel Duchenne Muscular Dystrophy Treatment Through Myoblast Transplantation Tolerance with Anti-CD45RB, Anti-CD154 and Mixed Chimerism

· Dystrophin and utrophin expression in muscle tissues of DMD mouse model after transplantation treatment by bone marrow mesenchymal stem cells

· Comparative analysis of antisense oligonucleotide analogs for targeted DMD exon 46 skipping in muscle cells

· Improvement of calcium handling and changes in calcium-release properties after mini- or full-length dystrophin forced expression in cultured skeletal myotubes

· Functional activity and expression of inducible nitric oxide synthase (iNOS) in muscle of the isolated distal colon of mdx mice

· Utrophin, a way to cure Duchenne muscle dystrophy

· Okadaic acid augments utrophin in myogenic cells

18.7.2004

Farmaceutická společnost PTC Therapeutics začíná testování nového léku pro pacienty se zvláštní mutací dystrofinového genu

Farmaceutická společnost PTC Therapeutics startuje I. fáze klinických pokusů s lékem nazvaným PTC 124, který byl vyvinut na speciální mutace v dystrofinovém genu u chlapců s DMD. Pro bezpečnost bude testován na zdravých dobrovolnících.

Pokud budou výsledky uspokojivé, plánuje farmaceutická společnost v South Plainfield, N.J. druhou fázi na pacientech s DMD v prvním pololetí roku 2005. (PTC bude také testován na pacientech s cystickou fibrózou). " Jsme rádi, že se tento projekt pohnul kupředu", řekla Sharon Hersterlee, ředitelka výzkumu MDA. PTC 124 dokáže ovlivnit čtení genetické informace, návodu pro tvorbu dystrofinu. To umožní přeskočit mutaci, která by jinak zastavila toto čtení.

PTC 124 , lék, který je podáván ústně, demonstroval schopnost obnovit tvorbu plně funkčního dystrofinu u myší s DMD. Lék má podobné účinky jako gentamicin, ovšem jinou strukturu a složení. Tento lék by mohl pomoci přibližně 15% pacientů s DMD, kteří mají tuto specifickou mutaci v dystrofinovém genu. K určení této specifické mutace je zapotřebí zvláštního testu, který je dostupný na Univerzitě v Utahu.

· Highly efficient EIAV-mediated in utero gene transfer and expression in the major muscle groups affected by Duchenne muscular dystrophy

· Full-length dystrophin expression in half of the heart cells ameliorates {beta}-isoproterenol-induced cardiomyopathy in mdx mice

· Decreased total nitric oxide production in patients with duchenne muscular dystrophy

· Tarantula Venom Peptide Shows Promise as a Drug

14.7.2004

· The relationship between clinical stage, prognosis and myocardial damage in patients with Duchenne-type muscular dystrophy: five-year follow-up study

· Therapeutic efforts in Duchenne muscular dystrophy; the need for a common language between basic scientists and clinicians

· Investigation of Poor Academic Achievement in Children with Duchenne Muscular Dystrophy

· Depression in Parents of Children With Duchenne Muscular Dystrophy

10.7.2004

Biotechologická firma Asklepios vyvíjí genovou terapii pro DMD/BMD

Xiao Xiao

Virus nesoucí DNA

MDA přidělila částku 1.6 millionů USD Severokarolinské bitechnologické firmě Asklepios, aby vyvinula genovou terapii pro DMD/BMD. Badatelé Richard Jude Samulski, ředitel Gene Therapy Center na Univerzitě Severní Karolíny v Chapel Hill, a Xiao Xiao, biolog z Oddělení molekulární genetiky a biochemie pittsburské university již dříve pracující na grantech MDA, jsou členy výzkumného týmu ve firmě Asklepios.

Firma plánuje vyvinout a otestovat system doručování miniaturizovaného genu pro dystrofin do svalů chlapců s DMD za pomoci viru. Dystrofin je protein, který u pacientů s DMD svaly nedokáží vyrobit kvůli poruše na genu pro dystrofin.

Po rozsáhlém toxikologickém odzkoušení vyžadovaném U.S. Food and Drug Administration (FDA), firma plánuje provést 1. fázi klinických pokusů na malém množství chlapců s DMD s cílem otestovat bezpečnost této látky na lidech.

Pokrok strategie čisté DNA pro léčbu DMD

Jon Wolff

Jon Wolff grantový pracovník MDA na Pediatrickém oddělění na University of Wisconsin Madison byl v týmu, který oznámil na setkání Americké společnosti pro genovou terapii 2. až 6. července 2004, že byl učiněn významný pokrok u metody intravaskulárního doručení čisté DNA do svalů.

Wolff úzce spolupracuje s biotechnologickou firmou Mirus, jejímž je hlavním vědeckým poradcem. Wolff a kolegové, místo aby použili k dopravě genu do svalu virů, injikovali do žil končetin čtyř mdx myší úplný lidský gen pro dystrofin, tzv. čistou DNA. Končetiny zaškrtili, aby udrželi zvýšenou koncentraci genu ve svalech. Badatelé zjistili, že od 3% do 15% svalových vláken produkovalo dystrofin zatímco oni očekávali množství pod 0.5%. Horní svalové skupiny končetin vykazovaly vyšší výskyt dystrofinu.

Badatelé tvrdí, že tato metoda doručení genu do svalů se zdá bezpečná, afektivní a nevyprovokovává nežádoucí imunitní reakce narozdíl od virové metody, kde občas k takovým reakcím dochází.

Minulý rok AFM ( Francouzská asociace proti svalovým dystrofiím ) spolupracující s biotechnologickou firmou Transgene oznámila, že čistá DNA je účinná když je injikována do svalu (nikoliv do krevního oběhu). Pokusy proběhly na 15 chlapcích s DMD nebo BMD, bylo jim injikováno malé množství čisté DNA, které vedlo k produkci dystrofinu v 1% až 10% svalových vláken (Quest, červenec, srpen 2003).

6.7.2004

· Loss of Myostatin Gene Builds Muscle in Humans

· Sizing up muscular dystrophy

· Functional improvement of dystrophic muscle by myostatin blockade

3.7.2004

· Muscle in Wyeth's Pipeline

Minulý měsíc fermaceutická firma Wyeth Pharmaceuticals začala první fázi pokusů s myo-29, látkou která blokuje produkci myostatinu. Myostatin je protein regulující růst svalů. Studie sponzorovaná firmou Wyeth publikovaná v New England Journal of Medicine předpokládá, že blokování myostatinu by mohlo být užitečné pro léčbu některých svalových chorob.

Publikovaná práce vychází ze studia čtyřletého chlapce s dvojnásobným objemem svalů a polovičním množstvím tuku než mají ostatní děti v jeho věku. Chlapec má zřejmě unikátní genetickou mutaci, která potlačuje produkci myostatinu. Z tohoto ale i z dřívějších výzkumů Wyeth věří, že blokování myostatinu pomocí myo-29 by mohlo pomoci při léčbě některých svalových chorob. Firma se soustředí na možnost, že by lék mohl zmírnit, ačkoliv ne vyléčit, svalové dystrofie. Dále by lék mohl být užitečný u jiných chorob postihujících svaly nebo u svalové ochablosti související s věkem.

Právě začala 1. fáze testování myo-29 takže jeho uvedení na trh je ještě daleko. Myostatin blokující mutace byly pozorovány jak v přírodě tak i nejméně u jednoho člověka a zatím nebyly pozorovány negativními vlivy, proto by léčba potlačující tvorbu myostatinu neměla mít vedlejší toxické účinky. To dává myo-29 šanci rychle přejít do fáze 2.

( Ve fázi 1 se testuje bezpečnost léku na skupině 20-80 lidí, ve fázi 2 účinnost a bezpečnost na 100-300 lidech, ve fázi 3 je lék podáván skupině 1000-3000 a je vyhodnocová účinnost, monitorovány vedlejší účinky, lék je porovnáván s již existujícími, pozn.překl. )

· Myostatin Mutation Associated with Gross Muscle Hypertrophy in a Child

· Gene Mutation Found in Muscle Man Toddler

· Super-Strong Toddler Studied For Muscle-Wasting Cure

· Scientists Study 'Baby Superman'

16.6.2004

· Biotech Firm to Develop Gene Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy

MDA (Americká asociace svalových dystrofiků ) přidělila 1.6 milionu dolarů severokarolinské firmě Asklepios pro vyvinutí genové terapie pro DMD. Firma bude vyvíjet a testovat virovou metodu dopravení miniaturizovaného genu do svalu chlapců s DMD. Dystrofin je svalová bílkovina, která u této choroby chybí. Rozsáhlé testování bezpečnosti bude vyžadováno před tím než bude možno testovat na lék chlapcích.

15.6.2004

Upregulace utrofinu

Ivana Švandová

Jedním ze směrů, kterým se ubírá vývoj léku proti DMD je upregulace čili zvýšení produkce bílkoviny utrofinu. Utrofin je do značné míry strukturním i funkčním homologem schopným dystrofin nahradit, a proto jsou všechny faktory vedoucí ke zvýšení jeho exprese důležitým cílem pro event. terapii svalových dystrofií. Pro lepší pochopení si nejdříve řekneme pár slov o tom jak vzniká bílkovina a pak teprve o faktorech, které vedou k zvýšení utrofinu.

Jak vlastně vzniká bílkovina?

Velmi zjednodušeně pojato, každá bílkovina je kódována v naší DNA, deoxyribonukleové kyselině, která se skládá z „písmenek“ – tzv. bází. Pokud má vzniknout nová molekula proteinu zakódovaného v DNA, musí se určitý úsek DNA tzv. přepsat procesem, kterému se anglicky říká transcription. Vznikne messenger RNA (mRNA), „poslíčková“ RNA – molekula RNA, ribonukleové kyseliny, která je tvořena taky bázemi, ale oproti DNA je to už specificky úsek, který víceméně odpovídá proteinu, jenž má vzniknout. Tato mRNA je dále „překládána“ v procesu translace: každé trojici bází odpovídá kódovaní nějaké aminokyseliny, a aminokyseliny jsou základní kamínky, z nichž jsou složeny proteiny. Během translace vznikne spojováním aminokyselin (podle toho, jak jsou postupně na mRNA „čteny“ jednotlivé trojice aminokyselin) bílkovina, je pak patřičně upravena a přenesena tam, kde má plnit svoji funkci.

To, jaký vznikne kdy protein, je složitě řízeno – na DNA jsou za sebou uloženy báze kódující rozdílné proteiny. Aby se to buňce nepletlo, má každý protein svoji adresu, poznávací značku, tzv. promotor. Promotor je určitý kousek DNA, který leží před bázemi kódujícími vlastní protein. Pokud je tento promotor odblokován nebo přímo stimulován, dochází k expresi daného proteinu, nebo alespoň jeho mRNA (v buňce lze detekovat mRNA pro spoustu proteinů, jejichž zvýšenou expresi ale nezaznamenáme, tj. dojde k přepisu, ale ne už k překladu).

Heregulin

Heregulin je růstový faktor, jehož podání zvyšuje hladinu nových molekul utrofinu v buňce. V tkáňových kulturách myotub (myších i lidských) zvedlo podávání heregulinu hladiny mRNA pro utrofin 2.5krát. Obdobně došlo po podání genu pro heregulin přímo do svalové tkáně ke zvýšení exprese genu pro utrophin také v in vivo pokusech.

Heregulin je látka (malý protein), která nepřímo reaguje s promotory různých genů. Prozatím je přesvědčivě doložen vztah mezi heregulinem a utrofinem a heregulinem a některými podjednotkami acetylcholinového receptoru (AChR), což je nejdůležitější typ receptoru na nervosvalovém spojení. Hladiny utrofinu i některých podjednotek AChR se zvýšily nejen v pokusech na tkáňových kulturách, ale také in vivo. Po navázání heregulinu na příslušný receptor dojde k aktivaci tzv. MAP-kinas, bílkovin navazujících fosfátovou skupinu na další proteiny v buňce. Tím tyto proteiny aktivují a v konečném důsledku dojde k aktivaci promotoru utrofinového genu. Gen je přepsán, přeložen a vzniká nová molekula utrofinu.

Zdroje: Molecular Biology of the Cell – odtud výřez z obrázku (Vol. 10, 2075-2086, 1999), Nucleic Acid Research (Vol. 29, No. 23, 4843-4850, 2001) a PNAS (Vol. 96, 3223-3227, 1999).

L-arginin

L-arginin je substrát enzymů ze třídy NO synthas. NOS jsou proteiny, které metabolizují arginin: mění jej na jinou aminokyselinu, L-citrulin, za současného vzniku molekuly oxidu dusnatého (NO, obr. 2). Ve svalových vláknech jsou NOS spojeny s proteiny dystrofinového komplexu (DAPC). U dystrofických pacientů jsou v nejhojnější míře degradována aprávě tzv. 2b vlákna, která obsahují NOS.

Oxid dusnatý má mnohé biologické účinky – je to malá a velice reaktivní molekula (radikál), ochotně reagující se širokou škálou látek a proteinů v buňce.

Ve svalové tkáni NO zvyšuje sílu kontrakce vlákna. NO je silné vasodilatans, jeho působením se zvyšuje průsvit cév zásobujících sval – sval má tak větší přísun živin (glukosy) a kyslíku a naopak produkty jeho metabolismu nebo degradace jsou rychleji odváděny; obecně se dá říci, že napomáhá dolaďovaní vztahu mezi metabolickými potřebami svalového vlákna a okolím. NO také přímo ovlivňuje metabolismus glukosy a železa. Velkou hrozbou patologických procesů ve všech typech tkání je vznik tzv. kyslíkových radikálů – NO je může „vychytávat“, reagovat s nimi a snižovat tak jejich obsah v buňce, tedy snižovat riziko tzv. lipoperoxidačního poškození membrány a poškození DNA (obr. 3). NO dále pomáhá udržení klidového membránového potenciálu na „normálních“ hodnotách, což je pro svalové vlákno signálem, že jeho komunikace s okolím je v pořádku, a pravděpodobně velmi složitou signální kaskádou napomáhá zpětně kontrolovat funkční stav nervosvalového spojení.

Celkově se dá říci, že podáváním L-argininu jako substrátu NO synthas se výše uvedené účinky NO posílí. Navíc se vyskytuje stále více dokladů, že metabolismus NO (tj. i jeho zvýšená syntéza po přidání L-argininu) ovlivňuje i syntézu strukturních proteinů nervosvalového spojení, hlavně utrofinu.

Zvýšená hladina NO v organismu má i svá rizika: vyjma nepříjemných tzv. nitrátových bolestí hlavy (způsobených hlavně rozšířením cévního řečiště) NO prokazatelně zvyšuje riziko krvácení (inhibuje shlukování krevních destiček) aj.

Obr.2 : Reakce NO s dalšími aktivními kyslíkovými radikály.

Z Neuromuscular Disorders 11 (2001) 517-524.

Obr.3 : Konverse L-argininu na L-citrulin plus oxid dusnatý (NO).

a) L-arginin; b) N^G-hydroxy-L-arginin; c) L-citrulin.

ADAM 12

ADAM 12 (nazývaný také meltrin) je jeden ze zástupců proteinů tzv. ADAM (a disintegrin and metalloprotease) rodiny. Jde o proteasu (bílkovinu štěpící jiné bílkoviny), která podporuje uchycování buněk v tkáních, dále diferenciaci a splývání myoblastů (nezralých buněk svalových vláken), nebo také např. splývání vajíčka se spermií během oplodnění. V lidském organismu se ADAM 12 vyskytuje ve dvou variantách: jako dlouhý protein zakotvený v buněčné membráně (ADAM 12-L) a jako krátká, secernovaná (buňkou do okolí vylučovaná) forma (ADAM 12-S). Je detekovatelný zejména v placentě, u dospělých jedinců v tkáni hladké i příčně pruhované svaloviny.

Svalové vlákno kosterní svaloviny je útvar vznikající splýváním mnoha nezralých svalových buněk – myoblastů. Tyto myoblasty přilnou jeden k druhému nejprve okraji své membrány a postupně splývají, až vznikne mnohajaderný útvar, svalové vlákno. Během vzniku svalového vlákna (myogenese) byla v jeho membráně pozorována právě zvýšená exprese ADAMa 12. Ve zdravé svalové tkáni se vyskytují tzv. satelitní buňky. To jsou buňky, které se neúčastní hlavní činnosti svalu, kontrakce, ale slouží zejména jako „zásobárna“, vznikají z nich nové myoblasty, když je sval poškozen a je potřeba nahradit část tkáně. Zobecněně, ze satelitní buňky se stane myoblast, a tyto myoblasty fúzují, až vytvoří nové svalové vlákno. Pokud by se tyto buňky podařilo cíleně „nastartovat“ a nové myoblasty pak donutit k fúzi, mohla by se otevřít další potenciální cesta k reparaci svalové tkáně dystrofických pacientů.

Skupina dr. Wewerové z Dánska použila upravené buňky nádorového onemocnění svalové tkáně (myosarkomové buňky), do kterých vnesla gen pro krátkou formu ADAMa 12. Tím byly buňky nuceny produkovat velké množství tohoto proteinu, a vědci sledovali, zda buňky v tkáňové kultuře nezačnou produkovat myoblasty, které by postupně splývaly za vniku svalového vlákna. Po nějaké době získali směs buněk, v níž identifikovali myoblasty v různých stadiích myogenese, a dokonce i fúzující myotuby s náznakem příčného pruhování, typického pro vlákna kosterní svaloviny a pro svalovinu srdeční. Tyto buňky ale nebyly uspořádány do žádného organizovanějšího útvaru. Nové myoblasty vznikaly pravděpodobně z buněk satelitních, popř. z blíže nedifinovaných buněk přítomné pojivové tkáně. V případě tohoto specifického typu myosarkomu se tedy podařilo pomocí ADAMa 12-S navodit myogenesi.

Zdroj: Novel, Secreted Form of Human ADAM 12 (Meltrin a) Provokes Myogenesis in Vivo

Brent J. Gilpin, Frosty Loechel, Marie-Genevie`ve Mattei, Eva Engvall, Reidar Albrechtsen, and Ulla M. Wewer

THE JOURNAL OF BIOLOGICAL CHEMISTRY Vol. 273, 1, 157–166, 1998

Můj osobní názor je takový, že do doby, kdy nebudeme víc rozumět procesům vedoucím ke splývání buněk a k tomu, jak je donutit se dělit a spojovat cíleně, žádný klinický pokus s ADAMem 12 nemůžeme čekat, protože s sebou přináší zejména příliš veliké riziko neoplasií, nekontrolovatelného buněčného dělení v různých typech tkání:

Práce dr. Wewerové pokročila dále, jako první se ji na transgenních myších podařilo také dosáhnout toho, aby produkovaly zvýšené množství ADAMa 12. Samičky těchto myší trpěly těžkou nadváhou, ve svalové tkáni jim vznikalo velké množství tukových buněk (adipocytů), tuk se ukládal i v dutině břišní. Samečci byli také obtloustlí, i když celková míra těchto projevů nebyla taková jako u samic. Ke vznikům nové tukové tkáně bylo zapotřebí dlouhé varianty ADAMa 12. Krátká varianta (ADAM 12-S), která nemá proteasovou aktivitu, přispívala ke vzniku adipocytů jen omezeně.

Zdroj: DAM 12 Protease Induces Adipogenesis in Transgenic Mice

Nobuko Kawaguchi, Xiufeng Xu, Rie Tajima, Pauliina Kronqvist, Christina Sundberg, Frosty Loechel, Reidar Albrechtsen and Ulla M. Wewer

American Journal of Pathology. 2002;160:1895-1903

15.6.2004

· Researchers Report Major Advance In Gene Therapy Technique

· Regenerative capacity of the dystrophic (mdx) diaphragm after induced injury

· Full-length dystrophin expression in half of the heart cells ameliorates beta-isoproterenol-induced cardiomyopathy in mdx mice

· MDA To Plan North American Clinical Trials Network For Muscular Dystrophy

· Recent advances in paediatric muscular dystrophies

· Progression of scoliosis after spinal fusion in Duchenne's muscular dystrophy

· Sacral Nerve Stimulation for Treatment of Fecal Incontinence in a Patient With Muscular Dystrophy

· Cardiomyopathy in Muscular Dystrophy Workshop 28–30 September 2003, Tucson, Arizona

10.6.2004

Kreatin pomáhá u DMD

U dětí s DMD, které užívaly kreatin jako dietní doplněk v dávce 0.1 gramu na 1kg váhy po dobu 4 měsíců se prokazatelně zvýšila síla stisku vyhraněné ruky i objem svalové hmoty. Mark Tarnopolsky (grant AMD), profesor pediatrie na Univerzitě v Hamiltonu, Ontario, Canada, vedl studii s 30 chlapci ,jejichž průměrný věk byl 10 let. 15 chlapcům byl podáván kreatin po dobu 4 měsíců, pak byla pauza 6 týdnů bez kreatinu a pak dostávali placebo . Druhá polovina chlapců dostávala placebo, které později nahradil kreatin. Plicní funkce, denní aktivita a schopnost plnit své úkoly - chůze do schodů, vystřihování, neprokázaly žádné zlepšení ale biochemický ukazatel degenerace se snížil. „Studie trvala pouze 4 měsíce. Bylo by třeba uskutečnit ještě dlouhodobější pokusy, abychom zjistili, zda kreatin má účinek i na funkčnost svalů“, uvedl Tarnopolsky.

Ostatní studie s kreatinem u různých neurologických nemocí přinesly rozporuplné výsledky. Belgická studie (2003) s 15 chlapci DMD a BMD porkázala, že skupina, která užívala kreatin měla méně kontraktur, větší sílu a nižší sklon k únavě, zvýšila se také četnost chůze. Výsledky pokusů Tarnopolského i ostatních vědců ukazují na příznivé účinky kreatinu. Tuto myšlenku potvrzují i studie na zvířatech.

28.5.2004

Vyjádření MUDr. Vondráčka ke klinickým pokusům s Cyclosporin-A a Prednisone

18.5.2004 jsme uveřejnili článek „Informace o klinickém pokusu s Cyclosporin A a Prednisone pro léčbu DMD od Prof.Dr. Rudolfa Korinthenberga“. K tomuto článku jsme dostali následující vyjádření MUDr. Petra Vondráčka z Ambulance Kliniky dětské neurologie, Fakultní dětské nemocnice Brno :

Osobně jsem k jejich projektu spíše skeptický z následujících důvodů:

1. Oba medikamenty, které mají silné protizánětlivé a imunosupresivní účinky, mohou ve svalech potlačit zánětlivé změny, které tam bývají jako jeden z vedlejších důsledků DMD a tím snad krátkodobě zvýšit sílu některých svalů. Douhodobý efekt však nikdy zatím nebyl prokázán a potenciální vedlejší efekty jsou vyznamné ( potlačení přirozené imunity, poruchy tvorby kosti, zásah do hormonálních regulací ).

2. Jejich studie se opírá o 2 uvedené studie z let 1993 a 1997, provedené v California Pacific Medical Center v San Franciscu. Od té doby ( 7 let ) však ani oni ani nikdo jiný o tom nic seriózního nepublikoval, ani v CPMC v tomto výzkumu dále nepokračovali, což je jistě divné, kdyby to bylo perspektivní. Zdá se proto, že se skutečně nejedná o aktuální perspektivní trend.

S pozdravem Dr.Vondráček

27.5.2004

· Therapeutic gene transfer to dystrophic diaphragm by an adenoviral vector deleted of all viral genes

· Cardiopulmonary failure in Duchenne muscular dystrophy--pathophysiology and management

· Decreased total nitric oxide production in patients with duchenne muscular dystrophy

· Ultrastructural changes in muscular tissues of dystrophin/utrophin double-knockout mice after bone marrow-derived mesenchymal stem cell transplantation

·

23.5.2004

· Myoblast survival enhancement and transplantation success improvement by Heat-Shock treatment in mdx mice

· Creatine monohydrate enhances strength and body composition in Duchenne muscular dystrophy

· Effect of creatine supplementation on skeletal muscle of mdx mice

18.5.2004

Informace o klinickém pokusu s Cyclosporin A a Prednisone pro léčbu DMD od Prof.Dr. Rudolfa Korinthenberga

Naše studie začala v lednu 2004. Bude se na ni podílet 10 středisek v Německu, Švýcarsku a pravděpodobně i Rakousku. Tato střediska budou muset najít 150 chlapců starších pěti let. Během prvních tří měsíců léčby budeme porovnávat terapii Cyclosporinem A (CsA) s placebem. Chceme vědět jestli dojde k nárůstu síly jak se dá předpokládat z 2 předchozích studií. Během následujících dvanácti měsíců budou obě skupiny ( CsA i placebo ) navíc léčeny pomocí Prednisone v přerušovaném režimu. Tímto chceme zjistit jestli účinnost léčby pomocí Prednisone může být zvýšena pomocí CsA. Dále, samozřejmě, chceme monitorovat vedlejší účinky.

11.5.2004

· Small-molecule gene therapy nearing trials

· Regeneration of Injured Muscle from Adult Stem Cells

10.5.2004

· Okadaic acid augments utrophin in myogenic cells

· Dystroglycan, a scaffold for the ERK–MAP kinase cascade

8.5.2004

· Abstracts that will be presented in the 7th Annual Meeting of the American Society of Gene Theraphy, June 2-6, Minneapolis, Minnesota

o Micro-Utrophin as a Therapeutic Protein in rAAV Mediated Gene Therapy for Duchenne Muscular Dystrophy

o Gender Differences in Transplantation Efficiency Using Muscle-Derived Stem Cells for Muscular Dystrophy

o Therapeutic Antisense-Induced Exon Skipping for Duchenne Muscular Dystrophy

o New Canine Models of Duchenne Muscular Dystrophy: Identification and Molecular Characterization

o A Novel MiniDys-eGFP Fusion Gene for Developing Cell-Based Therapies of Duchenne Muscular Dystrophy

o Expressing Full-Length Dystrophin in 50% Cardiomyocytes Corrects Cardiomyopathy in the Mdx Mouse Model for Duchenne Muscular Dystrophy

o Expression of Normal Dystrophin Following Myoblast Transplantation to Duchenne Muscular Dystrophy Patients

o rAAV-Mediated Gene Therapy To Treat Limb Girdle Muscular Dystrophy Type 2D (LGMD-2D)

o Transgenic Expression of Dp116 in Muscle Does Not Ameliorate Dystrophy in mdx^4cv Mice

o Systemic Gene Transfer to Striated Muscles Using rAAV6 Vectors

o Lentivirus Mediated Dystrophin Expression in mdx Muscles

o Nucleofection and Phage phiC31 Integrase Mediate Stable Introduction of a Dystrophin Fusion Gene into Muscle Derived Stem Cell and Human Myoblasts

o Successful AAV Vector-Mediated Gene Transfer into Canine Skeletal Muscle Required Suppression of Excess Immune Responses

o An AAV Vector-Mediated Micro-Dystrophin Expression in Relatively Small Percentage of Dystrophin-Deficient mdx Myofibers Still Improved the mdx Phenotype through Compensatory Hypertrophy

o Muscle-Derived Stem Cells Display an Extended, but Not Unlimited, Expansion Capability: Implication for Muscle Regeneration

o Delivery of Igf-I and Dystrophin to Dystrophic mdx Muscle

o Immunogenicity of Dystrophins Delivered to Mice by Gutted Adenoviral Vectors

o Human Myoblast Deimmortalization Using Tat-Mediated Cre Recombinase Delivery

o The Fetal Approach: A Novel Therapy for the Treatment of Musculo-Skeletal Disease

o In Utero Intramuscular Delivery of a High-Capacity Adenoviral Vector Carrying a Full-Length Murine Dystrophin cDNA Provides Functional Benefit and Reassembly of the Dystrophin-Glycoprotein Complex in Hind Limb Muscles of mdx Mice

· Pneumothorax associated with long-term non-invasive positive pressure ventilation in Duchenne muscular dystrophy

· Surgical treatment of spinal deformities in Duchenne muscular dystrophy: a long term follow-up study.

· Improvement of calcium handling and changes in calcium-release properties after mini- or full-length dystrophin forced expression in cultured skeletal myotubes

· Chimeric RNA and 2'-O, 4'-C-ethylene-bridged nucleic acids have stronger activity than phosphorothioate oligodeoxynucleotides in induction of exon 19 skipping in dystrophin mRNA

· Glucocorticoid corticosteroids for Duchenne muscular dystrophy

· Cloning of cDNA Encoding a Regeneration-Associated Muscle Protease Whose Expression Is Attenuated in Cell Lines Derived from Duchenne Muscular Dystrophy Patients

· Selected articles (8)from ATS - 2004 (American Thoracic Society International Meeting) - May 21-26, 2004

· Selected articles (22) from ATS - 2003,2002,2001 (American Thoracic Society International Meeting)

· Inducing muscle hypertrophy as a therapeutic strategy for muscular dystrophies

· Use of the Mechanical In-Exsufflator in Pediatric Patients With Neuromuscular Disease and Impaired Cough

· Anti-TNFalpha (Remicade) therapy protects dystrophic skeletal muscle from necrosis

17.4.2004

· Researchers pinpoint pathway involved in muscular regeneration

· Inducing muscle hypertrophy as a therapeutic strategy for muscular dystrophies

11.4.2004

Jak funguje Myodur

Ivana Švandová

Myodur je nově vyvíjený lék na svalové dystrofie, který vyvíjí biotechnologická firma Xechem. Pro pochopení toho jak funguje je potřeba si říct nejdříve pár slov o proteaze kalpain a vápníku.

Kalpain

Kalpainy jsou rozsáhlá rodina proteas – enzymů štěpících jiné proteiny v buňce. Štěpení (degradace) proteinů je proces normální, fyziologický, bez něj bychom například nemohli strávit většinu toho, co sníme (trypsin ve šťávě slinivky břišní je také proteasa). Pokud se ovšem proteas v buňce vyskytuje moc, jsou přehnaně aktivní nebo nejsou včas odbourány (deaktivovány), vznikají problémy – například degradace svalové tkáně. Různých forem kalpainů je asi 15; nejlépe prozkoumány jsou proteasy μ-kalpain, m-kalpain a kalpain 3 (jiná jména kalpainu 3 jsou CAPN3, p94). První dva se vyskytují ve všech buňkách savčího organismu, výskyt p94 je specifický pro kosterní svalovinu. Všechny tyto formy jsou aktivovány vápenatými ionty (na vápníku závislé, Ca²⁺ dependentní). Svalový kalpain 3 rozkládá molekuly jako fodrin (spektrin II), desmin, filamen, nebulin, vimentin, gelsolin, and vinculin C-protein, tropomyosin, troponin T, troponin I, titin, neničí ale přímo hlavní molekuly kontraktilního aparátu: alfa-actin, alfa-actinin nebo tzv. těžké řetězce myosinu.

Je to užitečná molekula, bez její funkce by se ve svalovém vlákně hromadily proteiny opotřebované zátěží, nicméně pokud není včas v patřičné míře deaktivována, začne vlákno ničit.

Kalpain 3 (p94) má jednu unikátní vlastnost – velice rychle rozkládá sám sebe (podléhá autolýze), čímž se deaktivuje. V jeho genu bylo nalezeno víc než 100 různých typů mutací. Většina z nich nezmění jeho strukturu natolik, aby nemohl dál štěpit své substráty, ale pozmění jeho autolytickou funkci: zmutovaná molekula kalpainu 3 se sama nerozkládá s tou ohromnou rychlostí jako molekuly vytvářené na podkladě nezmutovaného genu, časem se ve svalovém vlákně hromadí a díky tomu, že jiné její aktivity jsou zachovány, jej ničí, nadměrně degraduje proteiny potřebné k normální funkci vlákna.

To je podstatou specifické formy svalové dystrofie, tzv. LGMD2A dystrofie. Zatímco jiné formy dystrofií jsou dány hlavně primární poruchou tvorby strukturních proteinů membrány svalového vlákna (hlavně dystrofinu, ale i dalších proteinů stabilizujících membránu – sarkoglykanů, spektrinů aj.), tato forma dystrofie je vlastně poruchou enzymovou – někdy se jí říká také kalpainopathie. Kalpainy jsou obecně aktivovány vtokem vápenatých iontů do buňky. Tento tok je u všech forem dystrofií zvýšený, protože membrána vlákna je strukturně nestabilní, takže zvýšenou aktivitu kalpainů lze pozorovat u téměř všech dystrofiků. Toto je ovšem efekt sekundární, nezapříčiněný snížením autolytické funkce kalpainu 3 při různých mutacích. Spousta pacientů s jinými formami dystrofií, než je LGMD2A, má lehce defektní gen pro kalpain 3, takže sice trpí jinou dystrofií, ale snížená autolýza kalpainu se k tomu ještě přidá…

Kromě přímé zvýšené degradace proteinů také mutace v kalpainu 3 zvyšují náchylnost k poškození membrány svalového vlákna pracovním stresem, brání řádné myogenesi (normálnímu vzniku nových svalových vláken) a normální diferenciaci vláken už zralých.

Vápník

Vápník je nejdůležitější iont v buněčné signalizaci, jakákoliv živá buňka si udržuje jeho koncentraci ve svém vnitřku asi o 4 řády nižší, než je v jejím extracelulárním okolí. To dělá právě proto, aby si „všimla“ i malé změny v koncentraci vápníku uvnitř. Vápenaté ionty se váží na spoustu enzymů. Enzym je vlastně řetězec základních stavebních kamínků – aminokyselin, které jsou buď nepolární, nebo různě nabité. Díky tomu, jak jdou za sebou, se na základě náboje různě odpuzují nebo přitahují, a tak vzniká 3D struktura enzymu, která je nesmírně důležitá pro jeho funkci. Velmi hrubě řečeno, pokud není správná, nemůže se třeba dostat látka, co má být enzymem opracována, do tzv. aktivního centra enzymu, a enzym nefunguje.

A jak to souvisí s vápníkem? Vápník je nabitý, spolu se svým obalem tvořeným vodou dost velký iont. Když se naváže na enzym, vždy změní jeho 3D uspořádání. Většinu enzymů to aktivuje, některé naopak inhibuje, může také docházet k otevírání iontových kanálů a spoustě dalších událostí. Enzymy nepracují samostatně, ale v kaskádách, kdy činnost jednoho je závislá na předchozím. Vtok vápníků tak může (nejčastěji) aktivovat ohromný sled reakcí, proto jej buňka tak bedlivě hlídá.

Existuje víc způsobů, jak udržovat vápníkovou rovnováhu. Nejčastěji je hladina vápenatých iontů v buňce regulována tzv. vápníkovými pumpami, které jsou umístěny v buněčné membráně a aktivně (buňku to stojí spoustu energie) vápník odstraňují z buňky ven, nebo do vnitrobuněčných zásobáren (ve svalu do tzv. sarkoplasmatického retikula) odkud může být použit k signalizaci uvnitř buňky je-li třeba. Pak je několik enzymů, které jej specificky vyvazují, a několik dalších cest.

V případě kalpainu (kde se vápenaté ionty navazují na tzv. domému IV) dochází k jeho stimulaci a tím zvýšení aktivity. A protože u typu dystrofie LGMD2A je navíc kalpain defektní, nerozkládá sám sebe, začne se hromadit a ničit submembránový skelet vlákna. Tak vznikají dystrofické projevy. Příčinou tohoto typu dystrofie je tedy defekt v genu pro kalpain, který sám sebe včas nezničí a začne devastovat vlákno. U DMD/BMD je to defekt genu pro dystrofin, který se pak ve vlákně nevyskytuje nebo je defektní. Vápenaté ionty přehnanou reakci kalpainu spouští a udržují v chodu, ale samy o sobě nejsou příčinou tohoto typu dystrofie.

U všech dystrofií je zvýšená hladina vápníku v buňce, protože membrána buňky je díky nedostatku proteinů, které ji stabilizují, hodně křehká, má hodně nefyziologických „děr“, nesedí v ní pořádně enzymové systémy (jako už zmíněné pumpy) apod. Vápníku je pak v buňce příliš, aktivuje spoustu enzymů, které začnou buňku sekundárně likvidovat. Pokud do buňky teče příliš mnoho vápníku, nastává tzv. excitotoxická smrt, smrt z nadměrného dráždění. Dystrofická svalová vlákna zvýšený tok vápníku v podstatě “dorazí“, i když příčinou dystrofií sám o sobě není.

Jak to funguje?

Kalpain inhibitor leupeptin je poměrně velká a nabitá molekula, která sama přes membránu svalového vlákna neprojde. Potřebuje k tomu pomocníka – molekulu karnitinu, látky, která je schopna leupeptin navázat (1). Pro karnitin existují v membránách specifické přenašeče. Ty jej rozpoznají, spolu s jeho „nákladem“ (leupeptinem) na sebe naváží a přenesou dovnitř buňky (2). Ve svalovém vlákně se od sebe karnitin a leupeptin oddělí (3) a leupeptin může plnit svoji úlohu – inhibici kalpainu 3.

Leupeptin inhibuje kalpain 3 tak, že se přes jednu ze svých nabitých skupin naváže na aminokyselinový zbytek v jeho aktivním centru. Tím změní jeho prostorovou strukturu a kalpain už nemůže štěpit bílkoviny napojené na membránu svalového vlákna. Takto působí i spousta jiných látek, které inhibují enzymy.

Přínos Myoduru je v tom, že obsahuje membránový přenašeč karnitin. Proto specificky a efektivně zvyšuje přenos leupeptinu do srdeční a kosterní svaloviny a brání její degradaci.

10.4.2004

· Gene therapy restores mouse lung function

· Optimization of power wheelchair control for patients with severe Duchenne muscular dystrophy

· Treatment of Duchenne muscular dystrophy - defining the gold standards of management - 124th ENMC International Workshop

4.4.2004

· Anti-TNFalpha (Remicade) therapy protects dystrophic skeletal muscle from necrosis

· New funding for Duchenne muscular dystrophy research in UK

31.3.2004

Albuterol – první studie na DMD a BMD pacientech

MDA podporovaná první studie studie léku Albuterol pro DMD a mírnější variantu BMD provedená na UCLA (University of California at Los Angeles ) ukázala nadějné výsledky.

Albuterol je lék patřící do skupiny tzv. beta-2 agonistsů a je používán pro léčbu astma. Již delší dobu se tušilo, že má pozitivní vliv na svalstvo, že zvyšuje tvorbu svalových bílkovin a snižuje jejich rozklad. Toto potvrdila studie odbornice na svaly Melisa Spencer a neurologa Michael Graves publikovaná v březnovém vydáni Neurology.

Pokusu se zúčastnilo 9 chlapců ve věku od 5 do 9 lets DMD nebo BMD, všichni ještě chodící. Nejdříve byla změřena síla a funkčnost svalů, potom byl chlapcům po dobu 12 týdnů podáván orálně albuterol (Proventil Repitabs) nebo placebo.Ani děti ani lékaři netušili kdo kterou látku užívá. Po 4 týdnech přerušení užívání léku pacienti, kteří dříve užívali placebo, začali užívat albuterol a naopak, takže každý z nich užíval albuterol buď v první nebo druhé části pokusu.

Když badatelé analyzovali výsledky pokusu zjistili, že ti, kteří byli na albuterolu vykazovali větší svalovou výkonnost než ti, co byli na placebu a to hlavně u steheních svalů. Ne u všech svalů došlo k zesílení, badatelé se domnívají, že je to tím, že některé svaly absorbují albuterol lépe než jiné. Funkční testy jako například doba chůze, běh na vzdálenost 30 stop, vyjítí 4 schodů nebo zvednutí se z lehu neukázaly zlepšení. Podle badatelů by léčba albuterolem musela pravděpodobně trvat déle, aby se to projevilo na zlepšení funkčních testů. Žádné srdeční abnormality ( které byly předpokládány ) ani jiné vedlejší účinky nebyly pozorovány.

Větší a pravděpodobně delší studie bude nezbytná k tomu, aby potvrdila tyto výsledky a ujistila lékaře a rodiny, že tento lék je bezpečný a účinný pro léčbu DMD a BMD.

30.3.2004

Další pokrok týmu doktora Jacquese P. Tremblaye

Tým doktora Jacquese P. Tremblaye z Quebeku ohlásil první úspěšný pokus na pacientech s DMD, jimž byly injikovány myoblasty (nedospělé svalové buňky) od příbuzného dárce. Tyto myoblasty splynuly (sfúzovaly) s nemocnými svalovými vlákny pacientů a indukovaly v nich expresi normální genu pro dystrofin.

Do zatím první fáze déledobě plánovaného projektu byli zahrnuti tři hoši ve věku 8, 10 a 16 let. Dva mladší byli ještě samostatně pohybliví, nejstarší už byl upoután na vozík. Myoblasty dárců byly namnoženy v tkáňové kultuře (laboratoř dr. Tremblaye je v Kanadě jediná, která má povolení pro pěstování klinicky využitelných lidských buněk) a vpíchnuty pacientům. Chlapci dostali sérii 25 injekcí, vpíchnutých těsně vedle sebe do bérce (do svalu jménem musculs tibialis anterior). Každá injekce představovala 30 miliónů myoblastů vpravených do asi 1 centimetru krychlového.

Aby nedošlo k odvržení injikovaných myoblastů, užívali pacienti relativně nové imunosupresivum (látku potlačující imunitní reakci na tělu cizí buňky) Tacrolimus. Tacrolimus se ukázal jako nejvhodnější imunosupresivum, neboť na rozdíl od např. cyklosporinu nebrání fúzi myoblastů a neindukuje jejich apoptózu (programovanou buněčnou smrt) ještě před tím, než se začnou v nemocné tkáni dělit. U ani jednoho z pacientů nebyly při kontrolních odběrech prokázány protilátky proti buňkám dárců, u dvou starších chlapců se vyskytovalo jen nemnoho lymfocytů v místě vpichů, u nejmladšího žádné. Dva starší brali už před začátkem pokusu za účelem oslabení imunitních reakcí Deflazacort, poslední žádné kortikoidy.

O měsíc později byly z míst, kam byly zdravé myoblasty dárců injikovány, odebrány vzorky svalové tkáně (biopsie), které umožnily zjistit výzkumníkům, zda podané myoblasty daly vzniknout svalovým vláknům s dystrofinem. Dystrofin-pozitivních bylo v daných místech 6.8, 9.0 a 11.0% vláken, což je -vzhledem k ostatním dosud provedeným klinickým studiím- značný úspěch. Tato dystrofin-pozitivní vlákna byly vlastně podané buňky sfúzované s nemocnými vlákny. Dystrofin-poztivní byly i nové buňky vzniklé fúzí myoblastů mezi sebou, ale ty nebyly do počtu dystrofin-pozitivních vláken při hodnocení zahrnuty, neboť jejich fyziologický význam je nejasný.

Počet vpíchnutých myoblastů, které přežijí alespoň tři dny, není sice nijak vysoký, ale ty, co se v tkáni uchytí, se následně dělí velmi úspěšně: 75-80% injikovaných myoblastů sice do tří dnů umře, ale ty, co přežijí, je plně nahradí.

Dr. Tremblay říká: „Jsme těmito nadějnými výsledky velmi potěšeni. Jako první na světě jsme uspěli vlastně s obnovením svalových vláken produkujících dystrofin. První fáze našeho výzkumu otevírá slibné cesty k potenciální léčbě.“

Další fází tohoto projektu bude injikovat zdravé myoblasty do celého svalu, a to v počtu několika set injekcí. Jen tak bude možno ověřit, zda tato technika může posílit celkovou sílu svalu, nebo alespoň zabránit postupu jeho slábnutí. Skupina dr. Tremblaye nedávno od Health Canada obdržela povolení zvýšit počet injekcí z 25 na 100.

Tato technika je nadějná nejen pro DMD pacienty, ale i pro ty, co trpí recesivně zděděnou dystrofií. Na podobných technikách teď pracuje i několik dalších týmů v USA a Francii. Časem by mohlo jít o terapii vhodnou i pro poinfarktové stavy, kdy by bylo možno nahradit odumřelou tkáň.

Další podrobnosti : Dystrophin Expression in Myofibers of Duchenne Muscular Dystrophy Patients Following Intramuscular Injections of Normal Myogenic Cells.

29.3.2004

ADAM12 zmírňuje chorobné změny kosterního svalstva u mdx myší
UM Wewer (1), B Moghadaszadeh (1), R Albrechtsen (1), L Guo (2), M Zaik (3), N Kawaguchi (1), RH Borup (4), P Kronqvist (1), HD Schroeder (5), KE Davies (6), R Hermann (3), T Voit (3), FC Nielsen (4) and E Engvall (2).   (1) Univ. of Copenhagen, Copenhagen, Denmark; (2)The Burnham Inst., La Jolla, CA, U.S.A.; (3) Univ. of Essen, Germany; (4) Copenhagen Univ. Hospital, Copenhagen, Denmark; (5) Odense Univ., Odense, Denmark; (6) Univ. of Oxford, Oxford, U.K.

ADAM12 je disintegrin umístěný v membráně buňky, v buňce má řadu funkcí. Vyskytuje se v kosterním svalstvu během embrionálního vývoje a jeho tvorba ustává po narození. U vyzrálých svalových buněk se objevuje opět při regeneraci. Vytvořili jsme myši se zvýšenou tvorbou ADAM12 ve svalech. Po skřížení s mdx myšima jsme dostali ADAM12/mdx myši, které se vyznačovaly výrazně nižšími chorobnými změnami kosterního svalstva. ADAM12 chrání buňky před odumřením, to bylo potvrzeno imunohistochemicky a sníženou hodnotou CPK. Dále jsme dokázali, že ADAM12 zvyšuje tvorbu dvou komplexů : utrofin/DAG a alfa7-integrinu. Toto je objev nového mechanismu kompenzace deficitu dystrofinu v kosterním svalstvu. Předpokládáme, že ADAM12 je gen vylepšující fungování svalových buněk a mohl by být využit k léčbě DMD.

24.3.2004

· Erythropoietin: a new tool for muscle disorders?

· Rapid identification of female carriers of DMD/BMD by quantitative real-time PCR

· Management of patients with Duchenne muscular dystrophy

· Aquaporins in skeletal muscle: reassessment of the functional role of aquaporin-4

· The anabolic androgenic steroid oxandrolone in the treatment of wasting and catabolic disorders : review of efficacy and safety

· Gene therapy on muscular dystrophy

19.3.2004

· Report on a Round Table Conference in Monaco on 17 and 18 January 2004

· New findings on nerve cell proteins show promise for reducing disability

· Advances in AAV-mediated gene transfer for the treatment of inherited disorders

· Premature stop codons involved in muscular dystrophies show a broad spectrum of readthrough efficiencies in response to gentamicin treatment

15.3.2004

Pro léčbu DMD Badatelé kombinují kmenové buňky a genovou terapii

Louis Kunkel z Harvard Medical School a Jeffrey Chamberlain a Sheng Li z University of Washington oznámili , že kombinací terapií kmenovými buňkami a genovou terapií úspěšně léčí DMD myši. Myši byly léčeny speciálním typem svalových kmenových buněk označovaných SP (side population) do kterých byl přidán lidský gen pro dystrofin. SP buňky pochází z myších svalů a předpokládá se, že podobné buňky obsahují i lidské svaly. Badatelá injikovali SP buňky do ocasní žíly myší. Pak pozorovali jak buňky putují krevním oběhem a usazují se hlavně v poškozených oblastech svalů a produkují sice malé ale měřitelné množství lidského dystrofinu.

“Tato práce je jedním z prvních kroků k léčbě neembrionickými kmenovými buňkami” tvrdí Kunkel a dodává, že tím je vydlážděna cesta k pro použití pacientových geneticky opravených kmenových buněk k léčbě. Badatelé věří, že tato technika minimalizuje riziko odmítnutí kmenových buněk tělem pacienta.

13.3.2004

V dubnu se koná v San Francisku výroční setkání American Academy of Neurology. Je to pravděpodobně nejdůležitější celosvětové setkání neurologů. Na tomto setkáni bude prezentováno pouze 8 prací o DMD (o Parkinsonově chorobě 157, 257 o roztroušené skleróze). Příspěvky týkající se DMD :

· Bone Mineral Density in Pediatric Neuromuscular Disorders. Are All Patients at Equal Risk of Developing Osteopenia?

· Strength and Fatigue in mdx Mice Treated with Weekly Oral Prednisolone for 52 Weeks

· Testing Stabilizing Function of Dystrophin in Human Duchenne Muscle Dystrophy Cells (DMD) vs. Control Cells (CC) Due to Lowered Stress Tolerance: Promising In Vitro Testing Tool for Possible Functional Vital Transfection Efficiency Measurements

· Creatine Monohydrate Supplementation Appears Safe for Children with Neuromuscular Disorders

· Missense Mutations in the Actin Binding Domain (ABD) of Dystrophin Cause Muscular Dystrophy by Disrupting Protein Stability

· Combined Deficiency of Calpain and Dystrophin Mutually Reduce the Severity of Phenotypes?

· Factors Influencing the Transduction Efficiency and Duration of Transgene Introduced into Muscles by Plasmid-Mediated Electrotransfer (PMET)

· Gene Expression Profiling in Duchenne Muscular Dystrophy Patients Using Specifically Dedicated Oligonucleotide Microarray

6.3.2004

· Specific cognitive deficits are common in children with Duchenne muscular dystrophy

· Readthrough of dystrophin stop codon mutations induced by aminoglycosides

· Steroid Treatment and the Development of Scoliosis in Males with Duchenne Muscular Dystrophy

2.3.2004

· Systemic delivery of human microdystrophin to regenerating mouse dystrophic muscle by muscle progenitor cells

· ß₂-Agonist administration reverses muscle wasting and improves muscle function in aged rats

29.2.2004

· Long-term expression of full-length human dystrophin in transgenic mdx mice expressing internally deleted human dystrophins

· Restoration of dystrophin expression in mdx mice by intravascular injection of naked DNA containing full-length dystrophin cDNA

· Mini-dystrophin restores L-type calcium currents in skeletal muscle of transgenic mdx mice

· Transforming Growth Factor-ß1 Induces the Differentiation of Myogenic Cells into Fibrotic Cells in Injured Skeletal Muscle

· Dystrophin deletions and cognitive impairment in Duchenne/Becker muscular dystrophy

22.2.2004

· Sustained Improvement of Muscle Function One Year After Full-Length Dystrophin Gene Transfer into mdx Mice by a Gutted Helper-Dependent Adenoviral Vector

· Premature stop codons involved in muscular dystrophies show a broad spectrum of readthrough efficiencies in response to gentamicin treatment

· Loss of a single amino acid from dystrophin resulting in Duchenne muscular dystrophy with retention of dystrophin protein

21.2.2004

· Pharmaceutical patents : Medicament for treatment of Duchenne muscular dystrophy

14.2.2004

Výtah z přednášky profesora Masafumi Matsuo z Kobe University Japonsko

Profesor Masafumo Matsuo referoval o svých experimentech s vystřižením exonu (exon skipping), které byly zaměřeny hlavně na korekci delece exonu 20 u pacienta s DMD. Když chybí exon 20 je exon 19 připojen přímo na exon 21. A protože exon 19 končí po prvním písmenu třípísmenného genetického slova je čtení exonu 21 posunuto, což vede k dekódování stop kodonu na začátku 21 exonu. Exon 19 začíná třípísmenným slovem. Jestliže jej tedy odejmeme, délka genu se zmenší o 110 bází z 3685. Tento o 3% kratší dystrofin by měl být částečně funkční, takže by pacient měl trpět daleko méně závažnou formou BMD.

Japonští vědci experimentovali se sérií uměle vytvořených oligonukleotidů o délce 31 bází tvořených DNA a RNA vláknem. Z důvodu ochrany před buněčnými enzymy byly chemicky modifikovány. Testovány byly na kultuře svalových buněk, myocytů, pacienta s delecí 20 exonu. Až v 90% myocytů byl během pokusu detekován dystrofin. Další oligonukleotidy byly vytvářeny i pro exony 41, 44, 45, 51 ,53 a 55, což jsou nejčastější poškozené exony.

Pro první pokus nebyl použit oligonukleotid ale jednovláknová DNA s 31 sekvencemi. Po sedmi dnech bylo možno ve vzorku svalové tkáně detekovat dystrofin, po 10 dnech bylo možno detekovat dystrofin ve 20% nedospělých svalových buněk.

Dalším krokem bylo prokázat efektivitu u živých organizmů. Protože svalové membrány mdx myší nemají dystrofin jsou pro potenciální lék podávaný do krevního oběhu prostupnější než membrány u zdravých myší. Intraperitoneální podání 2mg/kg váhy vedlo konečně k očekávanému vystřižení exonu 19. Po dvou dnech byla detekována mRNA, a to nejen v kosterním svalstvu ale i v srdci a vydržela tam nejméně 14 dní po léčbě.

Tato in-vivo demonstrace otevřela cestu k prvnímu klinickému pokusu na člověku. Po obdržení povolení od příslušné etické komise desetiletý chlapec s delecí exonu 20, který již musel používat vozík a jehož buňky byly použity k pokusům in-vitro, obdržel 4 nitrožilní infůze a to jednu týdně po dobu 4 týdnů. Během dvou hodin obdržel vždy 0,5mg DNA oligonukleotidu na 1kg váhy. Den po každé infuzi byla dystrofinová mRNA detekována v lymfocytech pacienta. Její množství rostlo po každé další infuzi. Tato nová RNA bylo o 0.64% menší než stále ještě přítomná RNA s delecí 20 exonu. Týden po poslední infuzi byl pacientovi odebrán vzorek svalové tkáně a imunologickými metodami konečně dokázán dystrofin. Další a daleko detailnější analýzy této bílkoviny právě probíhají.

Zlepšení svalové výkonnosti zatím nebylo detekováno, úroveň CK se také zatím výrazně nezměnila. Oligonukleotidy, zdá se, jsou dostatečně stabilní protože byly detekovány ještě několik týdnů po aplikaci. Pacient je nyní sledován a testován. Nyní je plánováno opakování léčby čtyřmi následujícími infuzemi opět za rok. Možná ale bude rozhodnuto opakovat infuze v měsíčních intervalech či dokonce 2x měsíčně.

Pokud tato první klinická léčba dopadne tak úspěšně, jako to zatím vypadá, metoda vystřižení exonu bude zkoušena i na chlapcích s delecemi exonu v oblasti 8-18, 20 –22, 20 –23 a i na rozsáhlejších delecích kdekoliv v oblsti exonu 20 –42. Profesor Matsuo plánuje zahrnout do příštích klinických pokusů právě chlapce s rozsáhlými delecemi v těchto oblastech.

Podle posledních oficiálně ještě nepublikovaných informací prof. Matsuo předpokládá, že dystrofin-pozitivní bude téměř 100% svalových vláken. Zdá se, že svalová výkonnost pacienta se začíná lepšit, ikdyž je potřeba ještě další pozorování a testování, aby to bylo možno potvrdit.

8.2.2004

· Parent Project Muscular Dystrophy signs historic agreement with biotech to identify new Duchenne muscular dystrophy drug treatments

25.1.2004 americká organizace Parent Project Muscular Dystrophy (PPMD) podepsala historickou smlouvu s farmaceutickou korporací PTC Therapeutics of South Plainfield, New Jersey. Tato smlouva uvádí do pohybu výzkum Duchenneovy svalové dystrofie. Jednání v oblasti výzkumu DMD PPMD iniciovala již v březnu 2003, Tento project, nazvaný Project Catalyst, je prvním oficiálním partnerstvím PPMD s faramaceutickou firmou.

Vrámci projektu Catalyst provede PTC Therapeutics pod vedením vědeckého ředitele PPMD Dr. Lee Sweeny rozsáhlý automatizovaný průzkum s cílem objevit nový lék, který by omezil nebo dokonce úplně zastavil degeneraci svalstva u pacientů s DMD. PPMD financuje tento výzkum díky podpoře velkých sponzorů.

PPMD je největší organizace v USA zaměřená na Duchenneovu svalovou dystrofii. PPMD podporuje výzkum, vytváří standarty péče, snaží se urychlit vývoj léčby. Spojení usilí s biotechnologickým průmyslem je další z cest jak PPMD bojuje proti Duchenneově svalové dystrofii.

· Making new muscle: Researchers in Rome produce a mouse that can regenerate its tissues

· Stem cell-mediated muscle regeneration is enhanced by local isoform of insulin-like growth factor 1

· Viral expression of insulin-like growth factor-I enhances muscle hypertrophy in resistance-trained rats

· Extracellular HMGB1, a signal of tissue damage, induces mesoangioblast migration and proliferation

3.2.2004

· Xechem Files for FDA Orphan Drug Status for the Treatment of Muscular Dystrophy with MYODUR; MYODUR Recently Acquired Through Ceptor Merger

Firma Ceptor dceřinná společnost firmy Xechem vyvinula lék MYODUR. Tento lék, jehož bezpečnost a účinnost již byla vyzkoušena na zvířatech, obsahuje membránový transportér carnitin a dále leupeptin známý jako calpain inhibitor. Calpain je primární proteaza, která vyvolává apoptozu svalových buněk, u svalových dystrofií bývá v buňkách ve zvýšeném množství. Jak carnitine tak leupeptin jsou pro FDA známe látky, a protože vyrazně větší množství leupeptinu již bylo vyzkoušeno na lidech Xechem věří, že nejde o rizikový vývojový program. Klinické pokusy by měly začít v roce 2004 a protože jde o lék na těžkou a zatím neléčitelnou chorobu bude FDA stačit menši množství klinických testů. Samotné FDA je pak povinno prověřit podklady pro povolení léku ve zkráceném termínu 6 měsíců Tento lék nevede k tvorbě plnohodnotného dystrofinu, ale měl by zpomalit degradaci svalstva.

· Absence of Dystrophin in Mice Reduces NO-Dependent Vascular Function and Vascular Density: Total Recovery After a Treatment with the Aminoglycoside Gentamicin

25.1.2004

· Outcome of non-invasive positive pressure ventilation in paediatric neuromuscular disease

· Popping a pill could fix gene defect

20.1.2004

· Drugs May Help DMD-Affected Cells Read Through Genetic Errors

Biofarmaceutická firma PTC Therapeutics postoupila dále ve vývoji PTC124. Jde o lék, který umožňuje buňkám obejít jisté typy genetických chyb. Není to ale všelék, léčí jen jeden typ genetické poruchy – předčasný stop kodon. Nový lék by měl fungovat s menší toxicitou než gentamicin, ale s podobným účinkem. Studie na myších s DMD již prokázaly nižší toxicitu než u gentamicinu a obnovu tvorby dystrofinu. PTC124 se zatím stále vyvíjí a testuje, klinické pokusy se plánují na rok 2005.

· Supplement Test Results in Duchenne MD Are Slightly Encouraging

· High-Dose Prednisone Trial in DMD Revised, Now Open

17.1.2004

· The calcineurin signal transduction pathway is essential for successful muscle regeneration in mdx dystrophic mice

· Dystrophinopathy caused by mid-intronic substitutions activating cryptic exons in the DMD gene

· A-utrophin up-regulation in mdx skeletal muscle is independent of regeneration

16.1.2004

· Dystrophin Expression in Myofibers of Duchenne Muscular Dystrophy Patients Following Intramuscular Injections of Normal Myogenic Cells 

( Článek z Molecular Therapy, který jsme avizovali 12.2.2003 v článku „Transplantace normálních a geneticky pozměněných myoblastů“ )

11.1.2004

· Creatine increases IGF-I and myogenic regulatory factor mRNA in C2C12 cells

· Susceptibility to sarcomere injury induced by single stretches of maximally activated muscles of mdx mice

9.1.2004

· Enhanced Dystrophic Progression in mdx Mice by Exercise and Beneficial Effects of Taurine and Insulin-Like Growth Factor-1

· Targeting the Immune System to Improve Ventilatory Function in Muscular Dystrophy

· A possible role of tryptase in angiogenesis in the brain of mdx mouse, a model of Duchenne muscular dystrophy

· University of Rochester Awarded $6.5 Million to Study Efficacy OF rhIGF-I/rhIGFBP-3, SomatoKine, in the Treatment of Myotonic Dystrophy

Ø Free IGF-1 Administration

Ø rhIGFBP-3 Administration

5.1.2004

· Stem-cell 'secret of youth' found

2.1.2004

· ViaCell, Amgen in cell therapies deal

1.1.2004

· DGGE-based whole-gene mutation scanning of the dystrophin gene in Duchenne and Becker muscular dystrophy patients.

· Myospryn is a novel binding partner for dysbindin in muscle.

· Identification of transcripts from a subtraction library which might be responsible for the mild phenotype in an intrafamilially variable course of Duchenne muscular dystrophy

· Animal models used to study Duchenne's muscular dystrophy

* Tyto stránky jsou určeny rodičům i lékařům. Vše co považujeme za důležité pro rodiče se budeme snažit přeložit do češtiny. Výrazy napsané kurzívou nepřekládáme z důvodu nedostatečné znalosti odborné terminologie. Omlouváme se za případné nepřesnosti při překladu a děkujeme za pochopení.